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　　一、試劑盒組成

 

　　1.放大緩沖液：它包含了縮合酶、脫氧核苷酸、緩沖劑等，可以在PCR反應(yīng)中提供必需的能量和條件。

 

　　2.熒光染料：這個(gè)染料會(huì)與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中的DNA結(jié)合，在PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生熒光信號(hào)。

 

　　二、原理

 

　　染料法PCR試劑盒是基于熒光染料與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物DNA的結(jié)合反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)來(lái)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量。當(dāng)PCR進(jìn)行到關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，保序合成酶會(huì)開(kāi)始合成PCR產(chǎn)物。同時(shí)，放大緩沖液中所帶的熒光染料開(kāi)始與擴(kuò)增產(chǎn)物的DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)。熒光信號(hào)的大小與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量成正比，可通過(guò)熒光檢測(cè)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)的進(jìn)程。此外，染料法PCR試劑盒還可以檢測(cè)到PCR過(guò)程中是否發(fā)生非特異性擴(kuò)增，從而避免假陽(yáng)性信號(hào)的產(chǎn)生。

 

　　三、應(yīng)用

 

　　染料法PCR試劑盒可以應(yīng)用于多種領(lǐng)域，如基因表達(dá)定量、SNP分型、病毒檢測(cè)等。其中，基因表達(dá)定量是這類試劑盒最主要的應(yīng)用之一。在基因表達(dá)定量中，實(shí)驗(yàn)者通常會(huì)使用反轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再使用PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因，并根據(jù)熒光信號(hào)來(lái)計(jì)算目標(biāo)基因表達(dá)量。

 

　　優(yōu)點(diǎn)在于：

 

　　1.成本低：相比探針PCR試劑盒，染料法PCR試劑盒的成本低很多。

 

　　2.靈敏度高：具有很高的靈敏度，并且可以檢測(cè)到PCR過(guò)程中是否產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。

 

　　3.操作簡(jiǎn)單：相比傳統(tǒng)的PCR實(shí)驗(yàn)，染料法PCR實(shí)驗(yàn)操作更加簡(jiǎn)便快捷，更加適用于大規(guī)模分析。

 

　　總之，染料法PCR試劑盒是基因表達(dá)定量等實(shí)驗(yàn)中不可少的工具。雖然與傳統(tǒng)的探針PCR試劑盒相比具有一些局限性，但其成本低、靈敏度高、實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，受到越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室的重視。